離子交換層析檢測(cè)儀是利用樣品中帶電分子與色譜基質(zhì)固定相中帶相反電荷的部分之間的相互作用。這種類(lèi)型的分離很難使用其他技術(shù)，因?yàn)殡姾珊苋菀妆凰镁彌_液的pH值控制。兩種類(lèi)型的離子交換分離總體來(lái)說(shuō)是陽(yáng)離子交換和陰離子交換。在交換過(guò)程中若是陰離子互換為固定相帶+電荷，相反在陽(yáng)離子互換過(guò)程中，固定相帶負(fù)電荷。
離子交換層析是利用生物樣品中多種組分因自身不同的電負(fù)性而與離子交換劑產(chǎn)生不同的結(jié)合力，并通過(guò)改變洗脫液的離子強(qiáng)度，改變各組分與離子交換劑的結(jié)合力，而達(dá)到分離純化的目的。一般常用梯度洗脫法，即在洗脫的過(guò)程中逐步、連續(xù)增大洗脫液的離子強(qiáng)度，依次將各組分洗脫下來(lái)。
離子交換層析檢測(cè)儀與梯度混合器配合，可以產(chǎn)生離子強(qiáng)度呈線性梯度變化的洗脫液；在線檢測(cè)生物樣品隨洗脫液中離子強(qiáng)度改變的洗脫峰。通過(guò)改變線性梯度的斜率和其他一些條件，克服洗脫峰峰形過(guò)寬、拖尾和重疊現(xiàn)象，得到分辨率較好的分離效果。
1、離子交換層析分為哪幾種？
離子交換層析可以根據(jù)配基的不同可以分為陽(yáng)離子交換層析和陰離子交換層析。陽(yáng)離子交換柱可以吸附帶正電荷的蛋白，陰離子交換柱可以吸附帶負(fù)電荷的蛋白。
2、選陽(yáng)離子還是陰離子？
蛋白是兩性分子，具有等電點(diǎn)PI。當(dāng)緩沖液的PH值低于蛋白等電點(diǎn)PI，蛋白帶正電，選陽(yáng)離子交換柱；當(dāng)緩沖液的PH值高于蛋白等電點(diǎn)PI，蛋白帶負(fù)電，選陰離子交換柱。
3、強(qiáng)和弱的區(qū)別？
強(qiáng)離子交換劑載量在很寬的PH范圍內(nèi)保持恒定，弱離子交換劑載量會(huì)隨著PH而變化。強(qiáng)離子交換劑，當(dāng)選擇性不夠好時(shí)，嘗試弱離子交換劑。
4、如何選擇緩沖液PH值？
建議選擇PH6-8的中性緩沖液。可以使用和等電點(diǎn)相差1個(gè)PH的緩沖液作為初始嘗試，如果要達(dá)到最好分離效果，一般需要摸索PH條件。
